做流式真的很容易纠结：

样本来之不易，一次实验恨不得把所有指标都测完；

marker 越加越多，哪个都觉得不能删；

只有做超多色流式，才能一次检测完；

Panel 做到十几色，补偿却怎么都调不顺；

最后得到一张「丑」到拿不出手的流式图……流式最扎心的真相：颜色越多，不代表数据一定越好。

随着研究的深入，简单几个指标已经不能满足实验需求，而多参数 Panel 的设计，并不是简单地「给每个 marker 配一个颜色」。那么，如何判断哪些 marker 才是关键指标，进行合理的 Panel 设计？弱表达 marker 如何选择荧光染料？在进阶的光谱流式中，如何进行解混和数据分析？

为此，赛默飞联合丁香园将于10 月 15 日 14 点给大家带来《 从 Panel 设计到高维分析，多色流式实验进阶》线上研讨会，将围绕多参数流式实验中的关键问题展开分享，从 Panel 设计与优化、补偿与光谱解混，到高维数据分析，系统梳理多参数流式与光谱流式实验中的实用方法与技巧。

现在报名直播，除了有机会赢千里江山杯、实验室积木、阿布玩偶、京东卡等150 份好礼，还能免费领取《光谱流式细胞分析实验手册》和《流式细胞术实验方案》两本实用资料，系统掌握 Panel 设计、染色上机、补偿解混及数据分析等关键环节。

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直播亮点：

主题一，少走弯路：多参数流式 Panel 设计与优化实战

针对多参数 Panel 设计中的疑难点，从关键 marker、抗原表达水平、荧光染料亮度与光谱相似性等问题出发，结合样本处理、染色体系和对照设置，讲解如何减少串色与 spreading 干扰，提高关键细胞群的分辨率与实验稳定性。

主题二，从补偿到解析：光谱流式细胞术成功实践

从传统补偿与光谱解析的区别讲起，重点解析单色参考对照、自发荧光、仪器 QC 及解混结果判断等关键问题，介绍高维数据降维、聚类及常用分析方法，帮助大家从「把数据采出来」做到「把数据读明白」。

手册内容抢先看

本次直播同步准备了流式专题资料包，内容覆盖样本制备与染色、多参数 Panel 设计、抗体滴定与荧光染料选择、传统补偿与光谱解混，以及数据分析和细胞分选等关键环节。围绕常见实验问题梳理影响因素与操作要点，帮助大家从实验设计、上机检测到数据解析更快定位问题、优化流程。

1

弱表达抗原分辨率不够？配色时要同时看抗原丰度和荧光亮度

多参数 Panel 设计中，对于表达量较低、需要重点分辨的抗原，应优先选择亮度较高的荧光染料；高表达抗原则可以选择相对较弱的染料，从而把有限的检测空间优先留给关键指标。

2

Panel 参数越多越容易糊？重点关注光谱相似性和信号扩散

随着检测参数增加，光谱相近的荧光染料更容易带来信号扩散，降低相邻细胞群的分辨率。应尽量选择光谱特征差异更大、相互干扰更小的染料组合，而不是单纯追求颜色够不够用。

3

背景高、假阳性多？先排除死细胞，再优化抗体用量

死细胞容易非特异性结合抗体和染料，细胞碎片及聚团则可能干扰事件识别和设门。因此，多色 Panel 中应加入合适的死活染料，并在分析时依次排除碎片、双联体和死细胞。每支抗体还应在进入正式 Panel 前进行梯度滴定，避免用量过高增加背景和信号扩散。对于 Fc 受体表达较高的细胞，还应在抗体染色前进行适当的 Fc 受体封闭。

4

传统补偿总是调不准？先检查单色对照和仪器设置

Panel 中的每一种荧光染料都应设置相应的单色补偿对照，其阳性信号应达到或高于实验样本，同时不能超出检测器的线性范围。上机时应先确定合适的电压或增益，随后保持参数不变，再采集各单色对照。对于串联染料，补偿对照还应尽量使用与实验样本相同批次的染料。补偿只能校正平均荧光溢漏，不能消除信号扩散，也不能修正对照过暗、信号饱和或染色失败。

5

光谱解混效果不稳定？单色参考对照是关键

光谱解混依赖每一种荧光染料的参考光谱，单色参考对照的质量会直接影响最终结果。对照样本阳性信号应不低于实验样本，尽量保证阳性与阴性对照具有一致的自发荧光特征；单色参考的处理方式应和实验样本保持一致。

6

自发荧光影响解混？未染色对照要与实验样本匹配

不同组织、细胞状态和处理条件可能产生不同的自发荧光特征。光谱流式可以将自发荧光作为独立光谱成分进行识别和分离，因此未染色对照应与实验样本在处理上保持一致，避免影响后续解混和细胞群分辨。

多色流式不是颜色越多越好，关键是让每一个信号都清晰、可靠。从 Panel 设计、样本处理到光谱解混与数据分析，本次直播将系统讲清高参数流式的完整实验流程。现在报名，10 月 15 日 14 点来直播间即可领取两本流式实验手册，还有机会参与互动抽奖，赢取千里江山杯、蓝牙鼠标、实验室积木、京东卡等惊喜好礼！

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心动福利双响炮

报名礼：80 份阿布玩偶、定制冰箱贴免费送

前 80 名扫码填写问卷、最终报名成功且核实信息真实的幸运者，即可获得精美的阿布玩偶或定制冰箱贴（随机发）。

直播当日礼品：10 月 15 日当天直播间 70 份惊喜好礼

直播当天抽奖环节，70 位流式幸运官将有机会获得千里江山杯、蓝牙鼠标、实验室积木、便携式创意咖啡杯、京东卡等好礼。

注：以上所有奖品预计将于 10 月底陆续发出。

内容策划：邹礼平

内容审核：吴军

题图来源：图虫创意