师兄

你这外泌体电镜图背景怎么这么脏？杂蛋白也太多了吧。

超速离心机排了两周才轮到我，好不容易提出来，粒径一测也不对。

小李

师兄

样本量少才最头疼，超离那点产量，做一次下游实验就见底了。

这段对话，几乎是每个外泌体课题组的日常。血清干扰、杂蛋白污染、得率太低、样本类型不匹配……外泌体提取纯化问题五花八门，文献里的方法自己上手却未必管用。为更好服务大家开展外泌体研究，Umibio 针对不同样本类型，准备了一系列外泌体提取纯化试剂盒试用装，将预处理和提取纯化相结合，做差异化配方，最大程度帮老师们解决外泌体提取的困扰。覆盖细胞上清、血清/血浆、尿液、乳液、组织乃至细菌膜囊泡！不管你手上是哪种样本，先领一份试用装，用自己的样本亲自验一验，比看多少篇文献都靠谱。现点击下方图片，即可免费申请试用，轻松搞定外泌体提取纯化。

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文献数据可信赖，目前使用 Umbio 外泌体提取试剂盒发表的文献已有 800+ 篇。

外泌体提取纯化全流程避坑指南

一、预处理：先解决样本自带的「干扰源」

●细胞上清：源头尽量用无外泌体血清或无血清培养基；收集后尽早差速离心——300～800 g 10 min 去细胞，3,000 g 10 min 去碎片，10,000 g 10 min 去细胞器碎片。干细胞、神经细胞等分泌量低的样本，提取前可 3～5 倍浓缩。

●血清/血浆：若需排除血小板外泌体，选血浆；抗凝推荐 EDTA-2K，不用肝素，以免影响下游基因实验。溶血样本外泌体易降解，产量下降，慎用。

●组织/脂肪：新鲜组织及时液化处理后分离上清，可冻存；冻存组织块不建议。脂肪组织切小块后短期培养，让细胞把外泌体分泌到上清，再离心取上清，沉淀法富集。

●尿液/植物/牛奶/细菌：尿液主要防 Tamm-Horsfall 蛋白（THP），可通过调离子强度、pH 或还原剂解聚；植物采用低速离心 + 酶解 + 调 pH + 过滤，干品先泡发，多糖用酶解试剂去除；牛奶/母乳需去酪蛋白胶束，常用酸化至 pH 4.6、EDTA 或柠檬酸钠，EDTA 可提高纯度但可能改变蛋白谱与功能，建议预实验；细菌囊泡无通用方案，注意菌毛、鞭毛、噬菌体等共分离，尽量用 5 代内菌株、对数生长期，并做 3～5 倍超滤浓缩。

二、分离：选对方法，别只盯着超离

●磁珠法 vs 沉淀法：送测蛋白/脂质组学优先磁珠法。阴离子亲和磁珠通过电荷依赖结合外泌体，温和解离，完整度高、杂质低、去蛋白能力强，适合 WB 与组学研究。

●方法备选：除超速离心外，还可考虑沉淀法、磁珠法、阴离子交换色谱、切向流层析；提取后可接外泌体纯化滤柱（EPF 柱）去大囊泡和细菌，体积排阻色谱柱（SEC 柱）去小颗粒杂蛋白与游离核酸。

●重悬体积：20 mL 细胞上清一般用 200 μL PBS 重悬；想要更高浓度可适当少加。看不见沉淀属正常，重悬时把管底和侧壁都洗到。

●提高回收率：适量增加沉淀试剂用量，并适当延长静置时间——细胞上清不超过 16 h，血清/血浆等高浓度样本不超过 2 h，时间越长杂质也越多。

三、纯化：去杂蛋白、游离染料、游离核酸

●EPF 柱：0.22 μm，负责除菌、去大囊泡、游离核酸和部分杂蛋白。堵柱时可转 180 度再离心，或换新柱并适当延长离心时间；材料为PP，非无菌，使用前可紫外照射 30 min。

●SEC 柱：可去除 90% 以上杂蛋白，尤其小颗粒杂蛋白，外泌体综合回收率约 60%；过柱后可用 100 kD 超滤管进一步浓缩。它还能分离色素，外泌体先洗脱、色素后洗脱。

●染料去除：PKH26、PKH67、DiR 等脂溶性染料用沉淀法试剂盒去除；ACO520、ACO600、ACO800 等水溶性染料用超滤管去除。

●核酸/抗体去除：外泌体 miRNA/siRNA 电转后，游离核酸可用超滤或 SEC，一般选 SEC；纳米流式检测中未结合抗体，可用超离、超滤或 SEC，一般用超离。

四、保存：重悬、定量、冻存

●重悬：外泌体保存液不含蛋白，可直接重悬，使用前无需去除，体内外实验均无害无刺激；不可用双蒸水，以免囊泡涨破，建议用 PBS 或生理盐水。

●定量：保存液中的 DTT、EDTA、巯基乙醇等还原性物质会干扰 BCA 显色，导致浓度虚高，建议改用 Bradford 法。

●冻存：-80 ℃ 保存约一年；取出后冰上自然解冻，避免温度骤变损伤囊泡结构。

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内容策划：沈佳钰

内容审核：吴军