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1991 年就有论文证实:PCR 循环数超过 30,条带不会更亮

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PCR 是分子生物学最基础、最常用,却也最容易「翻车」的实验技术。条带拖尾、弥散、杂带丛生、扩增效率低、孔间差异大、实验难以重复…… 这些问题长期困扰科研人员,而绝大多数失败并非来自试剂或操作,往往是 PCR 程序设置不合理。

1991 年,国际权威期刊 Nucleic Acids Research 就发表经典研究证实:PCR 循环数超过 30 个周期后,特异性产物产量不再上升,反而持续下降;继续增加循环会出现明显拖尾与非特异性扩增;循环数达到 44 时,目标条带几乎完全消失。

1990 年,Nucleic Acids Research 另一篇论文研究证实:PCR 退火温度直接决定扩增特异性,温度过低易引发非特异性杂带,温度过高会导致扩增失败,合理优化退火温度是获得清晰可靠条带的关键。

PCR 想要稳定、高效、可重复,可以考虑遵循标准化参数逻辑。以下为实验室通用 PCR 核心公式,可直接套用。

表 1 PCR 核心参数干货表


表 2 常见问题快速修正表


综上,合理的程序设置是 PCR 成功的前提,而精准、稳定、均匀的温控系统,则是让参数真正落地、实验结果高度一致的硬件保障。

伯乐新一代 PCR 热循环仪:让实验参数真正落地

掌握了 PCR 优化的核心逻辑后,一台性能可靠的热循环仪,能让实验成功率直接翻倍。深耕 PCR 领域 40 余年的 Bio-Rad 伯乐,凭借深厚技术积累推出全新 PTC Tempo 与 PTC Harmony 系列热循环仪,以精准温控、智能操作、稳定性能,为现代分子生物学实验室提供一站式解决方案。


Bio-Rad 新款 PTC Tempo 和 PTC Harmony 热循环仪面向现代分子生物学实验室,适用于科研院校和生物医药研发质检场景,在保持热性能的同时增加了智能化操作功能。


PTC Tempo 和 Harmony

热循环仪的核心优势

精准温控

✔六模块独立控温:采用帕尔贴效应技术,六个独立热电模块控制温度均匀性,在升降温阶段保持稳定

✔快速升降温:专利轻量化样品模块,加热冷却速度快于标准模块,缩短实验时间

✔减少边缘效应:模块设计减少边缘效应,保证各孔位实验的一致性

智能优化

✔ 8 英寸触摸屏,图形界面直观易用

✔温度梯度功能:30~100 °C 范围内可设置 24 °C 梯度,单次实验优化退火温度,节省样本和试剂

✔动态升降温:算法调整升降温速度,使所有孔位同时达到设定温度,保证孵育时间一致

现代化操作

✔PTC Tempo 系列:

Wi-Fi 无线连接

BR.io 云平台,支持远程监控和设置实验

自动化盖可集成自动化工作流程(PTC Tempo 96/Deepwell/384 型号)

可选安全版软件,符合 FDA 21 CFR Part 11 要求

✔PTC Harmony 系列:

保留核心热性能

以太网和 USB 连接

手动盖性价比高

✔数据安全

云端数据自动备份

数据传输和存储加密

强密码策略

定期安全测试

产品型号


选择 Bio-Rad 的理由

40 年 PCR 技术积累

ISO 13485 质量认证

完整的技术支持网络

提供 PCR 仪器、试剂、成像分析完整产品线

Bio-Rad PCR 领域的可靠伙伴

配套产品

PCR 试剂:iScript cDNA 合成试剂盒、SsoAdvanced 预混液系列

电泳系统:Mini-Sub™ Cell GT 水平电泳仪系列

成像系统:GelDoc™ Go 和 ChemiDoc™ Go 凝胶成像系统

分子量标准:EZ Load 系列 DNA 分子量标准


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* Bio-Rad, GelDoc, ChemiDoc和Mini-Sub为Bio-Rad Laboratories, Inc. 在特定区域的商标。本文所使用的所有商标均归其各自所有者所有。© 2026 Bio-Rad Laboratories, Inc.

* 本产品仅用于科研用途,不用于临床诊断。

内容策划:沈佳钰

内容审核:周育红

题图来源:图虫创意

参考文献

[1]. Bell D A, DeMarini D M. Excessive cycling converts PCR products to random-length higher molecular weight fragments[J]. Nucleic Acids Research, 1991, 19(18): 5079.

[2]. Rychlik W, Spencer W J, Rhoads R E. Optimization of the annealing temperature for DNA amplification in vitro[J]. Nucleic Acids Research, 1990, 18(21): 6409-6412.

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